拿到样品后如何分离出线虫?这里有几种松材线虫分离方法的详细操作步骤

发表时间:2024-04-03 14:33

松材线虫分离是检疫中较为常见的方法,如何快速分离松材线虫对提高检疫效率具有重要意义,今天小编为你整理了目前常用的松材线虫分离方法,下面就跟随小编一起来学习一下吧。


松材线虫传统分离方法


1、贝尔曼漏斗分离法

(1)置备一只直径10-15cm的玻璃漏斗,玻璃漏斗末端接上一段长约15㎝的乳胶管,置于漏斗架上,在乳胶管上装一个止水夹。

(2)对媒介昆虫进行线虫分离时,可用剪刀将其剪碎或用尖头镊子、解剖针将其撕碎,剪取大小合适的2层纱布将碎体包裹,木质样品则剪成长3cm直径5mm左右的木条,将样品放入漏斗中,关闭漏斗下端乳胶管上的止水夹,然后从漏斗壁慢慢注入清水,使清水充满漏斗和下面乳胶管,水要漫过纱布包。

(3)浸泡24小时后,将培养皿置于乳胶管下,打开止水夹,接取15ml浸泡液,供镜检或作为样品送检[1]。

贝尔曼漏斗法分离图片.png


2、浅盘法


(1)分离装置由2个口径不同不锈钢或铝合金等材料制成的浅盘组成,里面口径略小,底部为粗网筛的浅盘放在另一个浅盘上面。

(2)将大小合适的2层纱布平铺于筛盘上,松木样品细木条(或木片、木屑)置于筛盘纱布上面,慢慢注入清水,使清水浸泡全部样品。

(3)浸泡24小时后,移去筛盘,把大浅盘内的样品浸泡液倒入烧杯中,烧杯内浸泡液中的线虫可通过自然沉降或离心方法,移去多余的水分,浓缩至适宜的量,以便显微镜检验[2]


松材线虫快速分离方法

1分钟快速分离松材线虫


技术原理

通过负压产生水流,水流通过检材内部微管,将微管内的线虫带出,从而获得线虫液样本[3]。


快速分离设备:松材线虫1分钟快速分离器

快速分离器SYF-0210A产品图2.jpg


快速分离流程

检材预处理

① 取得无松脂残留且断面平整的圆盘,直径5.0~20.0cm,厚度10cm左右为宜。

② 利用专用粘合胶将吸附罩与待检木材胶合。

③ 待胶水干后,将检材浸泡于水中。

线虫分离

① 将预处理好的检材浸泡在清水中(水面略低于检材的上沿)。

② 打开电源开关,此时吸附罩内有水渗入,达到待检量时,关闭电源开关。

③ 将吸附罩内的溶液倒入试管或烧杯中。

④ 吸取底部带有沉淀的分离液少许,进行检验。


以上就是松材线虫常见的分离方法,你学会了吗?通过以上方法获得的分离液即可进行下一步的镜检和分子鉴定。




DNA检测的金标准

实时荧光定量PCR技术

2009年南京林业大学和南京beat365体育亚洲版登录防治联合研发的松材线虫自动化分子检测鉴定技术,实现松材线虫病分子检测技术在我国各省市县的推广和普及化,依靠该检测技术,结合形态学方法,基本解决了我国松材线虫病检疫和监测过程中的鉴定技术难题。

BX-16M松材线虫自动化分子检测系统松材线虫实时荧光定量PCR检测方法

在该技术研究中,南京林业大学陈凤毛教授等以松材线虫的rDNA内部转录区为靶标,设计了一对实时荧光定量PCR引物和特异探针,构建了松材线虫实时荧光定量PCR检测方法。特异引物组合F11/R11与探针TaqMan-11能够较好地区分来自枯死松树体内的松材线虫、拟松材线虫、大核滑刃线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫和长尾属Seinura线虫。在10μL的反应体系中,能够检测出0.005pg的物种DNA含量。实时荧光定量PCR技术凭借其高灵敏度、高准确性和快速性等优点,已成为松材线虫分子检测鉴定主流方法,堪称DNA检测的金标准。


参考文献

[1] 冯士明. 简介松材线虫的分离方法 [J]. 云南林业, 2005, (02): 29.

[2] 王晨,宋绍禕,俞禄珍,等. 粒线虫分离方法的比较 [J]. 植物检疫, 2019, 33 (03): 29-32.

[3] 鲍友山,柴寅初,徐一芳. 松材线虫快速分离器[P]. 江苏省: CN307678827S, 2022-11-22.


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